Fatores de virulência e susceptibilidade a antifúngicos de Cryptococcus Spp / Virulence factors and susceptibility to Cryptococcus Spp. antifungals

Criptococose é uma doença grave que afeta tanto imunocomprometidos quanto imunocompetentes, com isso analisar a virulência é fundamental para novas terapêuticas. Objetivo: Analisar a capacidade de virulência e susceptibilidade aos antifúngicos de Cryptococcus spp. isolados de líquor de pacientes de hospital do norte do Paraná. Métodos: A partir de dois isolados clínicos C. neoformans e C. gattii, realizou-se a confirmação da identificação. Para a virulência, avaliou-se o tamanho da cápsula, capacidade de sobrevivência após exposição a neutrófilos, produção de melanina e urease. No antifungigrama por difusão em disco utilizou-se: anfotericina B, cetoconazol, voriconazol, itraconazol e miconazol. Resultados: C. gattii destaca-se por maior desenvolvimento da cápsula além da melhor capacidade de sobreviver a fagocitose em relação ao C. neoformans. No antifungigrama, ambos os isolados se apresentam sensíveis às drogas estudadas. Conclusão: Esses achados contribuem para a compreensão das diferentes patogêneses entre C. gattii e C. neoformans.

Cryptococcosis is a serious disease that can affect both immunocompromised and immunocompetent individuals, thus the virulence analysis is fundamental for the development of new treatments. Objective: To analyze the virulence and susceptibility of Cryptococcus spp. isolated from cerebrospinal fluid of patients from a hospital in the north of Paraná. Methods: From two clinical isolates, C. neoformans and C. gattii were confirmed and identified. For virulence, capsule size, survival capacity after exposure to neutrophils, melanin production and urease were evaluated. In the disc-diffusion method, the following antifungals were used: amphotericin B, ketoconazole, voriconazole, itraconazole and miconazole Results: It was observed that C. gattii presents greater results for development of the capsule beside presenting the best ability to survive phagocytosis in relation to C. neoformans. In the disc-diffusion method, both isolates presented sensitivity to the studied drugs. Conclusion: These findings contribute to the understanding of the different pathogens between C. gattii and C. neoformans.

Amphotericin-B and vancomycin-loaded chitosan nanofiber for antifungal and antibacterial application

In the present study, a mucoadhesive non-woven fiber mat (d= 116 nm) was fabricated by the electrospinning method using chitosan (80% Wt), polyethylene oxide (10% Wt), cysteine (4% Wt) and drugs (6% Wt), respectively. In addition, a comparative study was conducted to define effect of drugs and mucoadhesive agent on the nanofiber formation. FTIR, SEM, DSC and DMA were used to investigate the chemical and physical properties of the nanofibers. In vitro release of the drugs was assessed over a 48-hour period by the total immersion method. Release data were fitted to kinetic models, including the zero-order, first-order, Higuchi matrix, and Hixson-Crowell. Zone inhibition investigations were used to describe the inhibition content of vancomycin and amphotericin B loaded in the mats. The SEM images displayed a slight decrease in the fiber diameter with adding drugs and mucoadhesive agents. FTIR spectra confirmed that any undesirable reaction between VAN-AMB and CS-PEO was not observed. DSC test recognized the uniform distribution of drugs in the polymeric bead of the fiber without any crystal form. The elasticity modulus of the nanofiber was in an acceptable range for oral mucosa (approximately 5 Mpa). The results indicated that biodegradable mucoadhesive nanofibrous membranes released high concentrations of VAN in the first 24 hours, but the AMB release was affected in more controlled phenomena

Determination of amphotericin B in PLA-PEG blend nanoparticles by HPLC-PDA

In this work, we developed and validated an effective reversed-phase HPLC method with photodiode array (PDA) detection for the quantitative analysis of amphotericin B (AmB) in poly(lactide)-poly(ethylene glycol) (PLA-PEG) blend nanoparticles. Chromatographic runs were performed on a reverse phase C18 column using a mobile phase comprising a 9% acetic acid and acetonitrile mixture (40:60, v/v) under isocratic elution with a flow rate of 1 mL/min. AmB was detected at a wavelength of 408 nm. The validation process was performed considering the selectivity, linearity, precision, accuracy, robustness, limit of detection (LOD) and limit of quantitation (LOQ) of the method. A concentration range of 1-20 µg/mL was used to construct a linear calibration curve. The LOQ and LOD were 55 and 18 ng/mL, respectively. The mean recovery of AmB from the samples was 99.92% (relative standard deviation (RSD) = 0.34%, n=9), and the method was robust for changes in the flow rate of the mobile phase (maximum RSD=4.82%). The intra- and inter-assay coefficients of variation were less than 0.59%. The method was successfully used to determine the entrapment efficiency of AmB in PLA-PEG blend nanoparticles.

Neste trabalho desenvolveu-se e validou-se um efetivo método por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) em fase reversa com detecção por fotodiodos para a análise quantitativa de anfotericina B (AmB) em nanopartículas compostas por blendas de poli(ácido lático)-polietilenoglicol (PLA-PEG). Corridas cromatográficas foram realizadas sob coluna C18 de fase reversa com fase móvel consistindo de ácido acético 9% e acetonitrila (40:60, v/v), em eluição isocrática com fluxo de 1 mL/min. A AmB foi detectada no comprimento de onda de 408 nm. O processo de validação foi realizado considerando a seletividade, linearidade, precisão, exatidão, robustez, limite de detecção (LD) e limite de quantificação (LQ) do método. Uma faixa de concentração entre 1-20 µg/mL foi usada para obter a curva-padrão linear. Os valores de LD e LQ foram 55 e 18 ng/mL, respectivamente. A recuperação média da AmB a partir das amostras foi de 99,92% (desvio padrão relativo = 0,34%, n=9) e o método foi robusto, considerando alterações no fluxo da fase móvel (desvio padrão relativo máximo=4,82%). Os coeficientes de variação intra e inter dia foram inferiores a 0,59%. O método foi utilizado com sucesso para a determinação da eficiência de encapsulação da AmB em nanopartículas de PLA-PEG.

Efeito do dietilditiocarbamato de sódio (DETC) na susceptibilidade da cândida albicans à anfotericina B: em busca do sinergismo / Effect of diethyldithiocarbamate sodium (DETC) in the susceptibility of candida albicans to amphotericin B: in search of synergism

Candida albicans, fungo cosmopolita, é considerado um comensal comum da microbiota de pessoas saudáveis. No entanto, com o avanço da AIDS e outras condições que comprometem o sistema imunológico, como o tratamento de neoplasias dentre outros, fizeram com que as infecções fúngicas aumentassem 400 por cento nas últimas duas décadas (Beck-Sangue et al., 1993; Pfaller, 1994; Jarvis et al., 1995). A superóxido dismutase (SOD), fator de virulência em C. albicans, é requerida na detoxificação do superóxido. Sendo o dietilditiocarbamato de sódio (DETC) um potente inibidor da SOD, avaliamos no presente estudo o seu efeito fungicida na proliferação in vitro da Candida albicans, sozinho e em combinação com a anfotericina B. O DETC demonstrou um efeito dose-dependente e inibição significativa da proliferação com apenas 6hs de cultivo. A sua combinação com a anfotericina apresentou um efeito sinérgico com FIC = 0,8. Com o objetivo de avaliar as alterações ultraestiuturais induzidas pelo DETC, as leveduras foram tratadas ou não por 24 horas e então processadas para microscopia eletrônica de transmissão. A ultraestrutura de leveduras tratadas com 100l-tM ou 150l-tM de DETC apresentaram extração quase completa do citoplasma e componentes intracelulares. Além disso, foram observados múltiplos corpos vesiculares, contendo matéria de natureza diversa e figuras de mielina. Nossos dados sugerem indução de processo autofágico porém, novos experimentos com abordagem citoquímica serão realizados para confirmação dos resultados.

Determinación de la concentración mínima inhibitoria de anfotericina B en levaduras de interés médico / Determinatiosn of the minimum inhibitory concentration of amphotericin B in yeasts of medical interest

Con el objetivo de conocer la sensibilidad frente a la anforericina B, principal farmaco para el tratamiento de las micosis sistémicas, se determinó la concentración mínima inhibitoria (CMI) en 90 aislamientos clínicos de Candida y Cryptococcus mediante un mmicrométodo de dilución en caldo casitona. Los resultados permiten concluir que Cryptococcus neoformans fue más sensible que Candida albicans (medias geométricas 0,24 y 0,41 respectivamente). Sólo fue encontrada una cepa resistente (CMI= 16 mug/mL), perteneciente a la especie Candida krusei. La implantación de esta técnica en el Laboratorio de Micología del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí" permitirá establecer los patrones de sensibilidad y detectar la posible aparición de resistencia en las principales especies de hongos patógenos para el hombre en nuestro medio

Perfil de DNA cromossômico e sensibilidade à anfotericina B de clones de Candida albicans / Chromosomal DNA profile and susceptibility to amphotericin B of Candida Albicans clones

O perfil de DNA cromossômico e sensibilidade à Anfotericina B foram estudados em cinco clones derivados de diferentes amostras de Candida Albicans.Com base no teste de diluiçäo em ágar, os clones Ca 1.2, Ca 2.4, Ca 3.7 e Ca 5.5 mostraram comportamentos similares frente ao antibiótico.A partir do DNA cromossômico digerido com endonuclease Eco RI, hibridizado com "probe" de DNA A-27, apenas os clones Ca3.7 e o Ca 4.10 mostraram perfis similares.Neste trabalho näo se observou uma clara correlaçäo entre sensibilidade à anfotericina B e perfil de DNA cromossômico.